Фільм «300 спартанців: Відродження імперії» розгортається на фоні подій першої стрічки, проте розвивається паралельно, а не є продовженням. Тут ми стаємо свідками запеклої битви між грецькими та перськими військами, де Фемістокл влучає в царя Дарія, завдаючи йому смертельного удару. Його син, Ксеркс, повертає батька додому, де той, помираючи, намагається переконати його в необхідності мирного вирішення конфлікту. Проте Артемісія, командувач перського флоту, вказує Ксерксу на те, що слова Дарія слід трактувати інакше. Ксеркс вирушає в паломництво, знаходить печеру відлюдника і занурюється в магічні води, які перетворюють його на напівбога з жорстокими намірами знищити греків. Тим часом Фемістокл мріє про об'єднану Грецію і відправляється до Спарти, аби заручитися підтримкою Леоніда. Однак і Ксеркс, і Фемістокл отримують від спартанців рішучу відмову: захист свого народу для них є найважливішим. Тож основна битва розгорнеться на морі, де афінському флоту доведеться боротися проти могу...